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包含葫蘆巴堿和4羥基異亮氨酸的藥物組合物及其方法.pdf

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包含 葫蘆巴 羥基 異亮氨酸 藥物 組合 及其 方法
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摘要
申請專利號:

CN200880007277.X

申請日:

2008.03.03

公開號:

CN101657194A

公開日:

2010.02.24

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):A61K 31/198申請日:20080303|||公開
IPC分類號: A61K31/198; A61K36/48; A61K31/455; A61P25/16; A61K45/06 主分類號: A61K31/198
申請人: INDUS生物技術私人有限公司
發明人: S·巴斯卡蘭; M·維施馬拉曼
地址: 印度馬哈拉施特拉邦
優先權: 2007.3.5 US 60/893,075
專利代理機構: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 代理人: 唐曉峰
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法律狀態
申請(專利)號:

CN200880007277.X

授權公告號:

101657194B||||||

法律狀態公告日:

2013.10.23|||2010.04.28|||2010.02.24

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明涉及:具有多巴胺能活性和其它相關藥物活性的藥物組合物,其包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物和任選的賦形劑;制備包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物和任選的賦形劑的藥物組合物的方法,其中該方法包括下列步驟:(a)從植物來源中提取包含葫蘆巴堿和4-羥基異亮氨酸的澄清溶液;和(b)任選從該澄清溶液中沉淀葫蘆巴堿和4-羥基異亮氨酸的衍生物并且獲得所述的組合物;和通過使包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物的組合物結合細胞受體在體外提高多巴胺或抑制催乳素水平的方法。

權利要求書

1: 具有多巴胺能活性和其它相關藥物活性的藥物組合物,包含葫 蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物和任選的賦形劑。
2: 如權利要求1中所述的藥物組合物,其中葫蘆巴堿或其衍生物 的濃度在30%-90%且4-羥基異亮氨酸或其衍生物的濃度在10%-30%。
3: 如權利要求1中所述的藥物組合物,其中所述的葫蘆巴堿獲自 植物或動物來源。
4: 如權利要求1中所述的藥物組合物,其中所述的葫蘆巴堿獲 自葫蘆巴(Trigonella?foenum?graecum)和小果咖啡(Coffee?arabica)。
5: 如權利要求1中所述的藥物組合物,其中所述的葫蘆巴堿衍生 物選自鹽酸鹽衍生物、乙酸鹽衍生物、檸檬酸鹽衍生物、苯甲酸鹽衍生 物、鹽衍生物和酸衍生物,優選鹽酸鹽衍生物。
6: 如權利要求1中所述的藥物組合物,其中所述的4-羥基異亮 氨酸獲自植物來源,優選葫蘆巴。
7: 如權利要求1中所述的藥物組合物,其中4-羥基異亮氨酸的 衍生物選自鹽酸鹽衍生物、乙酸鹽衍生物、檸檬酸鹽衍生物、苯甲酸鹽 衍生物、鹽衍生物和酸衍生物,優選鹽酸鹽衍生物。
8: 如權利要求1中所述的藥物組合物,其中所述的賦形劑選自成 粒劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、甜味劑、助流劑、抗粘著劑、抗靜電 劑、表面活性劑、抗氧化劑、樹膠、包衣衣料、著色劑、矯味劑、增塑 劑、防腐劑、懸浮劑、乳化劑和滾圓劑。
9: 如權利要求1中所述的藥物組合物,其中將該組合物配制成選 自片劑、含片、錠劑、水或油混懸液、軟膏劑、貼劑、凝膠、洗劑、牙 粉、膠囊、乳劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、可分散粉末或顆粒、在硬膠囊 或軟膠囊中的乳劑、糖漿劑、酏劑、植物制品、營養制品和食品的劑型。
10: 如權利要求1中所述的藥物組合物,其中所述的其它相關藥物 活性選自抑制催乳素、肌肉松弛、作為兒茶酚胺類前體和減少性功能障 礙的作用和抗精神病藥導致的副作用。
11: 制備包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物 和任選的賦形劑的藥物組合物的方法,其中該方法包括下列步驟: a)從植物來源中提取包含葫蘆巴堿和4-羥基異亮氨酸的澄清溶 液;和 b)任選從該澄清溶液中沉淀葫蘆巴堿和4-羥基異亮氨酸的衍生 物并且獲得所述的組合物。
12: 如權利要求11中所述的方法,其中葫蘆巴堿或其衍生物的濃 度在30%-90%且4-羥基異亮氨酸或其衍生物的濃度在10%-30%。
13: 如權利要求11中所述的方法,其中所述的賦形劑選自成粒劑、 粘合劑、潤滑劑、崩解劑、甜味劑、助流劑、抗粘著劑、抗靜電劑、表 面活性劑、抗氧化劑、樹膠、包衣衣料、著色劑、矯味劑、增塑劑、防 腐劑、懸浮劑、乳化劑和滾圓劑。
14: 如權利要求11中所述的方法,其中所述的衍生物選自鹽酸鹽 衍生物、乙酸鹽衍生物、檸檬酸鹽衍生物、苯甲酸鹽衍生物、鹽衍生物 和酸衍生物,優選鹽酸鹽衍生物。
15: 如權利要求11中所述的方法,其中所述的澄清溶液提取自植 物葫蘆巴和/或小果咖啡,該方法包括下列步驟: a)剝離葫蘆巴屬和/或小果咖啡的籽; b)使用己烷溶劑給剝離的葫蘆巴屬(Trigonella)籽脫脂; c)使脂族醇和水的溶劑混合物通過剝離的籽以便提取包含葫蘆 巴堿和氨基酸的溶劑; d)對溶劑進行真空濃縮而得到半固體物質;和 e)將所述的半固體物質溶于去離子水而得到澄清溶液; f)使步驟(e)的澄清溶液通過離子交換樹脂柱以保留氨基酸和葫 蘆巴堿; g)洗脫柱并且濃縮洗脫液而得到所得物質; h)干燥所得物質的澄清溶液而得到可自由流動的粉末;和 i)將所述的粉末溶于溶劑而得到包含葫蘆巴堿和氨基酸的所述 澄清溶液。
16: 如權利要求15中所述的方法,其中將所述的籽剝離成優選約 2mm厚度的大小。
17: 如權利要求15中所述的方法,其中所述的溶劑混合物包含1∶ 9-9∶1,優選7∶3比例的脂族醇和水。
18: 如權利要求15中所述的方法,其中所述的脂族醇為乙醇。
19: 如權利要求15中所述的方法,其中用氨的水或醇溶液洗脫柱。
20: 如權利要求15中所述的方法,其中所述的溶劑選自雜環芳族 化合物、脂族化合物、酮類、氰化物、醇類、腈類、酯類、醚及其一種 或多種的混合物。
21: 如權利要求15中所述的方法,其中所述的溶劑為乙醇。
22: 如權利要求15中所述的方法,其中濃縮在40℃-80℃的溫度 下進行。
23: 如權利要求15中所述的方法,其中所述的氨基酸為4-羥基異 亮氨酸。
24: 包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物和任 選的賦形劑的藥物組合物在制備用于對需要的受試者控制與多巴胺相 關的疾病的藥物中的應用。
25: 如權利要求24中所述的應用,其中所述的受試者為動物,包 括人。
26: 包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物和任 選的賦形劑的藥物組合物在制備用于對需要的受試者控制由催乳素導 致的不良作用的藥物中的應用。
27: 如權利要求26中所述的應用,其中由催乳素導致的不良作用 選自不育、多囊卵巢病和泌乳增加。
28: 如權利要求26中所述的應用,其中所述的受試者為動物,包 括人。
29: 包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物和任 選的賦形劑的藥物組合物在制備用于對需要的受試者控制由多巴胺受 體拮抗劑導致的副作用的藥物中的應用。
30: 如權利要求29中所述的應用,其中所述的副作用為多巴胺受 體拮抗劑阻斷多巴胺受體導致的運動障礙。
31: 如權利要求29中所述的應用,其中所述的受試者為動物,包括 人。

說明書


包含葫蘆巴堿和4-羥基異亮氨酸的藥物組合物及其方法

    【發明領域】

    本發明涉及來自天然來源的新的組合物及其制劑。本發明還涉及新的組合物作為多巴胺能藥在用于控制與多巴胺相關的病癥,包括帕金森病中的應用。

    本發明還涉及與因抑制催乳素的化合物而減少催乳素,肌肉松弛,減少由抗精神病藥導致的副作用,減輕因催乳素增加導致的性功能障礙和作為強化精神警覺度的化合物的相關的應用。

    發明背景和現有技術

    多巴胺為存在于脊椎動物和無脊椎動物中的激素和神經遞質。從化學上講,它是存在于腦中的苯乙胺并且作為活化特異性多巴胺受體(D1-D5)的神經遞質起作用。多巴胺在腦中具有許多功能,包括在行為和認知,運動活性,動機和報答,調節產乳,睡眠,情緒,注意力和學習中的重要作用。多巴胺在食欲,社交能力,突出性(salience),行為障礙,潛伏性抑制和創造力驅動中起重要作用。多巴胺還涉及調節催乳素分泌。

    多巴胺水平不足引起如顫動,強直和運動遲緩(運動緩慢)這類癥狀。在健康受試者中,神經元在腦和身體的其它部分中產生并且釋放多巴胺。當一個神經元釋放多巴胺時,它被下一個神經元的受體接受。這種鏈反應最終導致神經興奮。各種神經性障礙可以干擾多巴胺產生并且導致腦中多巴胺水平下降。多巴胺水平異常還導致許多病癥,其中的某些為慢性變性性的(如帕金森病)。

    多巴胺強烈影響運動和腦的思考區域。一種類型的多巴胺在運動和運動系統中起作用。當多巴胺水平下降至低于“正常范圍”時,運動和大幅度運動問題開始出現。已知在腦的運動區中的多巴胺水平極低產生具有諸如如下癥狀的帕金森病:肌強直和僵硬,彎腰體位/不穩定體位,平衡和協調缺失,步態(步型)紊亂,運動緩慢和隨意運動困難,小步步態/步行,肌痛,顫動和搖動,固定的面具臉表情,緩慢單調的言語,精細運動技能受損,在步行時跌倒和認知/智力能力受損。

    低水平多巴胺損害集中于環境或“鎖定”任務、活動或交談的能力。低水平多巴胺使得專注和集中極為困難并且還涉及注意力不集中的注意力缺陷多動癥(ADHD)。

    多巴胺還在抑制催乳素分泌方面起重要作用。催乳素為垂體中催乳激素分泌細胞分泌的肽激素。催乳素在誘導催乳和性欲望滿足方面(因多巴胺水平低導致。足夠的多巴胺水平是性喚起所需的)起重要作用。多巴胺作為主要的催乳素抑制因子起作用并且由下丘腦神經元分泌入門脈血流,結合泌乳細胞上的受體并且抑制催乳素合成和分泌。催乳素水平增加具有許多不良作用,如不育,多囊卵巢綜合征(PCOS),頭痛,性欲減退和視力問題。高催乳素水平因許多因素導致,包括身體和精神緊張。因此,多巴胺能化合物(增加多巴胺水平)在調節(限制)催乳素水平方面起關鍵作用,由此控制高水平催乳素的各種作用。

    發現運動員、健身者和運動家實施的長期和大強度運動也導致催乳素水平增加。這種催乳素的增加使他們的性欲下降并且誘發性功能障礙。因此,多巴胺能藥可以用于降低催乳素水平且由此通過維持這種激素在生理極限內消除所述副作用。

    多巴胺能藥可以用作肌肉松弛藥,因為它抑制乙酰膽堿產生的興奮。因此,本發明的多巴胺能物質可以用作運動生理學、麻醉和肌痙攣情況中的肌肉松弛藥。

    低水平多巴胺的主要作用之一在于運動障礙。運動障礙是影響產生和控制運動的能力的一組疾病和綜合征。為了產生任何形式的運動,甚至簡單的運動也需要復雜信號網絡的協調和行動。破壞這一系統中的任何部分都可能導致人產生過于弱,過于有力,過于共濟失調或對在手邊的任務的控制能力過差的運動。不需要的運動可以在靜止時發生或有意識的運動可以變得不可能。這類情況稱作運動障礙。

    在某些情況中,異常運動為低水平多巴胺的唯一癥狀。導致異常運動的病癥包括:帕金森病,因藥物或毒物導致的帕金森病,帕金森-加綜合征(進行性核上麻痹,多系統萎縮和皮質-基底神經節變性)。

    這些病癥因神經遞質多巴胺缺乏或過量導致。藥物療法可以有助于補償基底神經節回路的某些失衡。乙酰膽堿為有助于調節腦中多巴胺的興奮性化學物質。在體內,在神經末梢上釋放的乙酰膽堿導致肌肉收縮。

    帕金森病為進行性變性疾病,它破壞產生多巴胺的細胞并且在協調運動中產生問題。其特征在于顫動,強直,運動不能和體位不穩定。主要的生化異常在于多巴胺耗盡并且導致乙酰膽堿與多巴胺之間失衡。帕金森病的原因尚不清楚。幾乎沒有病例中存在弱的遺傳相關性。它還可以因用作殺蟲劑的環境毒素MPTP(甲基苯基四氫吡啶)導致。

    帕金森病通常為65歲以后發生的中老年病癥。它由腦中稱作“黑質”或黑色物質的神經細胞群死亡導致,因它們在外觀上看起來發暗。來自這些細胞的神經突出正常擴展至腦中另一個稱作紋狀體的區域,其中它們連接并且釋放稱作多巴胺地化學物質作為神經遞質。

    黑質和紋狀體有助于控制運動,包括我們開始運動的能力。在黑質紋狀體途徑缺失的情況下,帕金森病患者存在執行上的極度困難,諸如從椅子上站起和開始步行。他們也經歷顫動增強和肌肉強直。

    目前治療與多巴胺相關的疾病(例如:帕金森病和與低水平多巴胺相關的疾病)的方法包括:

    L-多巴(二羥基苯丙氨酸)

    由于帕金森病的病因為釋放多巴胺的神經細胞缺失,所以治療該病的一種手段在于恢復腦中的多巴胺水平。多巴胺不通過血液進入腦。在神經細胞中,多巴胺由一系列酶催化的化學反應產生。該次序中的最后階段為由氨基酸L-多巴形成多巴胺。L-多巴易于從血液中交叉進入腦。帕金森病最普遍和有效的治療在于給予片劑形式的L-多巴。

    L-多巴進入血流并且進入腦。在腦中,多巴脫羧酶將其轉化成多巴胺。L-多巴在全身運動、面部表達和體位方面產生極為顯著性的改善。然而,它對顫動、吞咽、平衡和運動緩慢開始的作用極差。

    其它藥物與L-多巴的聯合用藥

    將L-多巴轉化成多巴胺的酶多巴脫羧酶存在于血液和身體組織中。因此,L-多巴在血清中降解至90%的程度。這種情況因其它藥物,如卡比多巴和芐絲肼抑制該酶而得到阻斷。將它們與L-多巴聯用可增加其腦利用度。卡比多巴和芐絲肼不進入腦。

    托卡朋和安托卡朋(Entacalpone)

    L-多巴還被另一種酶COMT(兒茶酚O-甲基移位酶)破壞。這些藥物抑制COMPT并且使得L-多巴被腦利用。而這些藥物與L-多巴聯用存在長期問題。在長期給予L-多巴時,患者在其作用上可能發生波動。在動作發生上可能發生較大的延遲并且藥物作用期可能縮短。患者還發生作用脫離期。這意味著患者在給藥后長期完全起效良好,但他們可能發現這種藥物作用突然終止了。

    L-多巴的副作用:大部分患者感覺惡心;延長使用它可以誘發精神分裂癥,尤其是幻覺和睡眠紊亂。持續使用還導致緩慢和不隨意運動。

    MAO抑制(單胺氧化酶)

    增加腦中多巴胺形成的可選擇方法通過給予L-多巴以減少多巴胺分解來進行。多巴胺被酶單胺氧化酶(MAO),特別是MAO-B分解。司來吉蘭抑制MAO-B。

    受體激動劑

    能夠通過使用直接對多巴胺受體起作用的藥物補償多巴胺缺失。藥物,如溴隱亭、利舒脲為受體激動劑。它們刺激對多巴胺有應答的受體并且作為黑質紋狀體神經元正常釋放的多巴胺替代物起作用。這些藥物誘導一定范圍的不隨意運動并且對控制許多重要激素分泌的垂體(大腦的一部分)中多巴胺受體起作用。多巴胺受體活化而抑制激素催乳素釋放的副作用為不育和月經失調。

    抗膽堿能藥

    在腦的紋狀體中,多巴胺和乙酰膽堿都為神經遞質。多巴胺導致神經細胞抑制,而乙酰膽堿導致其興奮。當腦失去多巴胺細胞時,乙酰膽堿的活性為完整的。因此,一種策略在于減少乙酰膽堿并且平衡其作用與多巴胺的作用。抗膽堿能藥在減輕顫動方面更有效,不過,它們對肌僵硬和運動困難不具有作用。這些藥物存在許多副作用,如口干、視力模糊、便秘、排尿困難等。

    US專利4880816中描述了一種化合物,其中多巴胺與另一種分子DHC,特別是具有血腦屏障穿透特性的葫蘆巴堿以化學方式合并。在本文中,DHC化合物作為多巴胺的輔助物起作用以便通過血腦屏障,并且斷裂和消除。因此,它不會限定任何葫蘆巴堿的多巴胺能作用。

    目前的療法靶向癥狀緩解,且沒有能夠抑制神經元變性的活性劑。對長期控制并且副作用最少且功效最佳的較為平和和較為溫和的療法存在迫切需求。本發明滿足了對多巴胺能產品的迫切需求,該產品可以有效地用于控制與多巴胺缺乏相關的疾病,包括帕金森病。

    抗精神病藥的主要缺點在于其阻斷多巴胺的D2受體。因此,這些藥物產生與阻斷腦中多巴胺受體D2相關的運動障礙副作用。因此,多巴胺能藥可以作為對作為抗精神病藥副作用產生的不動性的響應。

    發明目的

    本發明的主要目的在于獲得具有多巴胺能活性和其它相關藥物活性的藥物組合物。

    本發明的另一個主要目的在于獲得包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物任選與賦形劑的藥物組合物。

    本發明的另一個目的在于研發制備包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物任選與賦形劑的藥物組合物的方法。

    本發明的另一個目的在于從植物來源提取葫蘆巴堿和4-羥基異亮氨酸。

    本發明的另一個目的在于使用所述的藥物組合物制備用于對有需要的受試者控制與多巴胺相關的疾病的藥物。

    本發明的另一個目的在于使用所述的藥物組合物制備用于對有需要的受試者控制由催乳素導致的不良作用的藥物。

    本發明的另一個目的在于使用所述的藥物組合物制備用于對有需要的受試者控制由多巴胺受體拮抗劑導致的副作用的藥物。

    發明陳述

    因此,本發明涉及:具有多巴胺能活性和其它相關藥物活性的藥物組合物,其包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物任選與賦形劑;制備包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物任選與賦形劑的藥物組合物的方法,其中該方法包括下列步驟:(a)從植物來源提取包含葫蘆巴堿和4-羥基異亮氨酸的澄清溶液;和(b)任選從該澄清溶液中沉淀葫蘆巴堿和4-羥基異亮氨酸的衍生物并且獲得所述組合物;包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物任選與賦形劑的藥物組合物在制備用于對有需要的受試者控制與多巴胺相關的疾病的藥物中的應用;包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物任選與賦形劑的藥物組合物在制備用于對有需要的受試者控制由催乳素導致不良作用的藥物中的應用;和包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物任選與賦形劑的藥物組合物在制備用于對有需要的受試者控制由多巴胺受體拮抗劑導致副作用的藥物中的應用。

    附圖簡述

    圖1:表示測試藥物在減輕僵住癥中的劑量依賴性反應。該圖表示IBH-B作為本發明的測試藥物。IBH-B(10,30或100)+Hal(0.5)和L-多巴(10)+Hal(0.5)的所有值在P<0.001下均有顯著性并且IBH-B(3)+Hal(0.5)與Hal(0.5)在相應時間相比無顯著意義。IBH-B治療顯著減輕了氟哌啶醇誘導的僵住癥。

    圖2:表示如圖中IBH-B所示的測試藥物使顫動評分顯著下降。

    圖3:表示測試藥物對酪胺增強作用的作用(急性研究)。

    圖4:表示測試藥物對酪胺增強作用的作用(慢性研究)。

    圖5:例證測試化合物對MAO-B選擇性抑制的響應曲線。

    發明詳述

    本發明涉及具有多巴胺能活性和其它相關藥物活性的藥物組合物,其包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物任選與賦形劑一起。

    在本發明的另一個實施方案中,葫蘆巴堿或其衍生物的濃度在30%-90%且4-羥基異亮氨酸或其衍生物的濃度在10%-30%。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的葫蘆巴堿獲自植物或動物來源。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的葫蘆巴堿獲自葫蘆巴(Trigonella?foenum?graecum)和小果咖啡(Coffee?Arabica)。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的葫蘆巴堿衍生物選自鹽酸鹽衍生物、乙酸鹽衍生物、檸檬酸鹽衍生物、苯甲酸鹽衍生物、鹽衍生物和酸衍生物,優選鹽酸鹽衍生物。

    在本發明的另一個實施方案中,4-羥基異亮氨酸獲自植物來源,優選葫盧巴。

    在本發明的另一個實施方案中,4-羥基異亮氨酸的衍生物選自鹽酸鹽衍生物、乙酸鹽衍生物、檸檬酸鹽衍生物、苯甲酸鹽衍生物、鹽衍生物和酸衍生物,優選鹽酸鹽衍生物。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的賦形劑選自成粒劑,粘合劑,潤滑劑,崩解劑,甜味劑,助流劑,抗粘著劑,抗靜電劑,表面活性劑,抗氧化劑,樹膠,包衣衣料,著色劑,矯味劑,增塑劑,防腐劑,懸浮劑,乳化劑和滾圓劑。

    在本發明的另一個實施方案中,將所述的組合物配制成選自片劑,含片,錠劑,水或油混懸液,軟膏劑,貼劑,凝膠,洗劑,牙粉,膠囊,乳劑,霜劑,噴霧劑,滴劑,可分散粉末或顆粒,在硬膠囊或軟膠囊中的乳劑,糖漿劑,酏劑,植物制品,營養制品和食品的劑型。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的其它相關藥物活性選自抑制催乳素,肌肉松弛,作為兒茶酚胺類前體和減少性功能障礙的作用和抗精神病藥導致的副作用。

    本發明還涉及制備包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物任選與賦形劑一起的藥物組合物的方法,其中該方法包括下列步驟:

    a)從植物來源提取包含葫蘆巴堿和4-羥基異亮氨酸的澄清溶液;和

    b)任選從所述的澄清溶液中沉淀葫蘆巴堿和4-羥基異亮氨酸的衍生物并且獲得所述的組合物。

    在本發明的另一個實施方案中,葫蘆巴堿或其衍生物的濃度在30%-90%且4-羥基異亮氨酸或其衍生物的濃度在10%-30%。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的賦形劑選自成粒劑,粘合劑,潤滑劑,崩解劑,甜味劑,助流劑,抗粘著劑,抗靜電劑,表面活性劑,抗氧化劑,樹膠,包衣衣料,著色劑,矯味劑,增塑劑,防腐劑,懸浮劑,乳化劑和滾圓劑。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的衍生物選自鹽酸鹽衍生物,乙酸鹽衍生物,檸檬酸鹽衍生物,苯甲酸鹽衍生物,鹽衍生物和酸衍生物,優選鹽酸鹽衍生物。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的澄清溶液提取自植物葫蘆巴和/或小果咖啡,該方法包括下列步驟:

    a.剝離葫蘆巴屬和/或小果咖啡的籽;

    b.使用己烷溶劑給剝離的葫蘆巴屬(Trigonella)籽脫脂;

    c.使脂族醇和水的溶劑混合物通過剝離的籽以便提取包含葫蘆巴堿和氨基酸的溶劑;

    d.對溶劑進行真空濃縮而得到半固體物質;

    e.將所述的半固體物質溶于去離子水而得到澄清溶液;

    f.使步驟(e)的澄清溶液通過離子交換樹脂柱以保留氨基酸和葫蘆巴堿;

    g.洗脫柱并且濃縮洗脫液而得到所得物質;

    h.干燥所得物質的澄清溶液而得到可自由流動的粉末;和

    i.將所述的粉末溶于溶劑而得到包含葫蘆巴堿和氨基酸的所述澄清溶液。

    在本發明的另一個實施方案中,將所述的籽剝離成優選約2mm厚度的大小。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的溶劑混合物包含1∶9-9∶1,優選7∶3比例的脂族醇和水。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的脂族醇為乙醇。

    在本發明的另一個實施方案中,用氨的水或醇溶液洗脫柱。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的溶劑選自雜環芳族化合物,脂族化合物,酮類,氰化物,醇類,腈類,酯類,醚及其一種或多種的混合物。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的溶劑為乙醇。

    在本發明的另一個實施方案中,在40℃-80℃的溫度下進行濃縮。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的氨基酸為4-羥基異亮氨酸。

    本發明還涉及包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物任選與賦形劑一起的藥物組合物在制備用于對有需要的受試者控制與多巴胺相關的疾病的藥物中的應用。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的受試者為動物,包括人。

    本發明還涉及包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物任選與賦形劑一起的藥物組合物在制備用于對有需要的受試者控制由催乳素導致不良作用的藥物中的應用。

    在本發明的另一個實施方案中,由催如素導致的不良作用選自不育、多囊卵巢病和泌乳增加。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的受試者為動物,包括人。

    本發明還涉及包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物任選與賦形劑一起的藥物組合物在制備用于對有需要的受試者控制由多巴胺受體拮抗劑導致副作用的藥物中的應用。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的副作用為多巴胺受體拮抗劑阻斷多巴胺受體導致的運動障礙。

    在本發明的另一個實施方案中,所述的受試者為動物,包括人。

    本發明的一個實施方案涉及包含葫蘆巴堿,其衍生物,4羥基異亮氨酸,其衍生物和任選的賦形劑的組合物在制備具有多巴胺能活性的藥物中的應用。所述的葫蘆巴堿可以來源于植物和動物來源。該組合物用于增加腦中的多巴胺濃度且由此改善與低多巴胺水平相關的疾患,諸如帕金森病,運動障礙等。該組合物用于與催乳素抑制,停止泌乳,肌肉松弛,減輕性功能障礙,提高精神警覺度和其它多巴胺相關功能相關的活性。該實施方案的另一個方面在于具有多巴胺能活性的組合物為選擇性單胺氧化酶B抑制劑。本發明的另一個方面在于具有多巴胺能活性的組合物與含酪胺的物質不發生相互作用且由此在受試者攝入具有高水平酪胺的物質時不會升高血壓。

    本發明的另一個實施方案涉及組合物在制備具有能夠抑制需要的受試者催乳素水平的多巴胺能活性的藥物中的應用。本發明的另一個方面涉及該組合物在治療多囊卵巢病中的應用。本實施方案的另一個方面涉及該組合物在制備用于治療不育的藥物中的應用。本實施方案的另一個方面在于制備用于調節人性激素水平的藥物。

    本發明的另一個實施方案涉及具有多巴胺能活性的組合物在制備減輕由多巴胺受體拮抗劑導致的傷害,由此誘導不動性的藥物中的應用。

    本發明的另一個實施方案涉及具有多巴胺能和藥物活性的組合物,其包含葫蘆巴堿,葫蘆巴堿衍生物,4羥基異亮氨酸,其衍生物和賦形劑。

    本發明包含葫蘆巴堿或其衍生物和4-羥基異亮氨酸或其衍生物任選與賦形劑一起的組合物在本文中還稱作本說明書中的測試藥物或測試化合物。

    本發明目前的實施方案的主要優點在于測試藥物為單胺氧化酶-B抑制劑。它因這種選擇性而不會引起對膳食酪胺的應答,由此防止了為非-選擇性MAO抑制劑的主要副作用的“干酪反應”。第二個優點在于具有多巴胺能活性的該組合物可以減少抗精神病藥物的副作用。第三,該組合物還可以抑制催乳素分泌,這為一個主要優點。

    本發明詳細描述了用于從諸如葫蘆巴和小果咖啡(植物名)這類植物中分離和純化化學標記的方法。所述的化學標記為生物堿葫蘆巴堿并且作為其鹽酸鹽,乙酸鹽,檸檬酸鹽,磺酸鹽,甲磺酸鹽,氫碘酸鹽,苯甲酸鹽或酸性無機和有機酸鹽提取,但優選作為鹽酸鹽提取。研究這種純化的提取物在各種典型動物模型中的生物活性。該化合物的一個新的方面在于它具有如通過作為每個批準的方案的具體動物實驗證實的多巴胺樣活性。因此,已經通過我們的發明首次證實化合物葫蘆巴堿表現出多巴胺能活性。

    一個實施方案的簡述如下:

    a.剝離包含葫蘆巴堿的籽,例如葫蘆巴子或小果咖啡籽以暴露內核,從而確保有效脫脂,提取和加工。

    b.使己烷溶劑反復通過葫蘆巴子床以便對葫蘆巴子進行有效脫脂。該操作不必對小果咖啡籽進行。

    c.將剝離的籽載入滲濾液并且使由脂族醇和水組成的溶劑混合物通過該層以便對所述的葫蘆巴堿和氨基酸(4羥基異亮氨酸)與皂苷進行有效提取。

    d.在低溫下對溶劑進行真空濃縮以確保物質的完整性并且將所得物質溶于去離子水而得到澄清溶液。

    e.使由此獲得的澄清溶液通過凝膠形式的強酸陽離子交換樹脂以保留所述的氨基酸和葫蘆巴堿。

    f.使用去離子水洗滌柱以使不含所有雜質和顏色并且用具有5N濃度強度的氨的水溶液或醇溶液洗脫柱。

    g.在真空中濃縮溶劑洗脫液中洗脫的化合物以便除去水和溶劑并且溶解所得物質且過濾而得到澄清溶液。

    h.對獲得的澄清溶液進行噴霧干燥而得到可自由流動的粉末并且可以照此使用。

    i.將粉末再溶于異丙醇或乙醇而得到澄清溶液。

    j.對純化的提取物進行HPLC測定以證實該分析。

    此外,使澄清的醇溶液任選接觸氯化氫氣流以便將葫蘆巴堿和4-羥基異亮氨酸轉化成其相應的鹽酸鹽衍生物。

    將作為葫蘆巴堿和/或其衍生物和4羥基異亮氨酸和/或其衍生物的上述化合物的純化提取物給予Swiss?Albino小鼠作為每個氟哌啶醇方案。這會誘發帕金森癥狀。該提取物以劑量依賴性方式逆轉這些癥狀,從而證實該提取物的多巴胺能或多巴胺樣活性。

    將作為葫蘆巴堿和/或其衍生物和4羥基異亮氨酸和/或其衍生物的上述化合物的純化提取物給予Swiss?Albino小鼠以便檢驗它在氧代震顫素拮抗機制中的作用。這證實了適度的抗膽堿能活性,使得它明顯地適合于帕金森病治療。

    合并了適度抗膽堿能作用的多巴胺作用為治療與多巴胺相關的病癥,包括帕金森病的最佳方法。帕金森病不僅因多巴胺耗盡引起,而且因多巴胺和乙酰膽堿失衡導致。

    多巴胺為腎上腺素和去甲腎上腺素的前體。因此,該化合物可以增加腎上腺素的濃度并且提高精神警覺度和行為。多巴胺為抑制性神經遞質。它可以控制乙酰膽堿的作用。提出的提取物和化合物可以用于運動生理學中的肌肉松弛目的。

    多巴胺能物質降低激素催乳素水平。催乳素涉及性功能障礙。該化合物可以用于抑制催乳素。催乳素誘導哺乳母親泌乳。多巴胺能物質抑制催乳素。該化合物可以用于終止泌乳。

    在本發明的另一個實施方案中,具有多巴胺能活性的組合物來源于植物來源。

    1.使用滾筒式刨片機將葫蘆巴子或任意其它包含葫蘆巴堿如小果咖啡籽的籽剝離至1mm-4mm大小的厚度大小。通過剝離至優選2mm厚度大小暴露內核。將剝離的籽裝入安裝了適當篩目,優選100目的底部濾器的提取器,以便確保籽粉不會與溶劑一起運動。使己烷通過包緊的籽層滲濾。

    2.使滲濾的溶劑在8-10小時期限內有效再循環,使得所得葫蘆巴籽粉不含油和脂質。這種去脂質化操作不必對小果咖啡籽進行。

    3.用包含1∶9-9∶1,優選7∶3比例的含水脂族醇的溶劑混合物作為溶劑再提取己烷提取的粉。就小果咖啡籽而言,使醇溶劑減少至9份水與1份醇的最低醇組成。所述的醇可以為甲醇,乙醇,異丙醇且優選乙醇作為醇溶劑。使含水醇混合物從上部經滲濾器中的葫蘆巴子層到達底部。使該溶劑再循環過程在室溫下持續8小時-10小時,優選8小時的時間期限。通過視覺檢查來自底部滲濾器的澄清提取物中任何懸浮的顆粒,且如果必要再過濾。

    4.在50℃-75℃,優選55℃的溫度下對澄清濾液進行真空濃縮至得到糊狀物質并且回收溶劑。將該糊狀物再溶于去離子水而得到由約5%固體含量組成的澄清溶液。

    5.使所述的澄清溶液通過由凝膠形式的強酸陰離子組成的離子交換樹脂柱并且用5N氨水溶液洗脫。還可以用氨的水醇溶液,優選乙醇、異丙醇或甲醇按照1∶1比例洗脫柱。

    6.將解吸的溶液真空濃縮至50%固體含量并且在直流噴霧干燥器中噴霧干燥成粉末。任選將通過上述方式獲得的粉末按照1∶20粉末與醇比例溶于乙醇或異丙醇且然后過濾。

    7.任選將澄清濾液冷卻至0℃-5℃,優選0℃的低溫并且使氯化氫干燥氣流通過它以便沉淀作為其相應的鹽酸鹽衍生物的葫蘆巴堿和4羥基異亮氨酸。過濾沉淀的衍生物并且洗滌掉雜質且在60℃-90℃的真空干燥。

    進一步借助于下列實施例闡述本發明。然而,這些實施例不應用于限制本發明的范圍。

    實施例1:

    在滾筒式刨片機中將具有含水量低于5%的1000克葫蘆巴子剝離至2mm厚度。使剝離的物質上具有300mm床高的柱。在35℃下使5升己烷通過葫蘆巴子層并且使從底部收集的洗脫液再循環通過葫蘆巴子層10小時期限。10小時后,從葫蘆巴子層排空己烷。在35℃下使由異丙醇和水按照4∶1比例組成的溶劑混合物(8升)經再循環洗脫液通過該層8小時期限。8小時后,從葫蘆巴床排空提取物并且在50℃下和真空中濃縮所有收集的提取物而得到半固體物質。

    將濃縮的物質再溶于5升去離子水而得到澄清溶液。使該澄清溶液通過含400ml強酸陽離子交換凝膠型樹脂的柱2小時。使用由正-丁醇∶乙酸∶水按照12∶8∶4比例組成的系統作為流動相在硅膠預涂布板F254(1.05554.007)上檢查柱洗脫液上進行TLC篩選,不存在葫蘆巴堿,并且在UV?254nm下觀察。在飽和柱后,使用4升去離子水洗滌掉樹脂床的顏色和粘附的雜質。使用800ml?5N濃度的氨水以400ml/小時的速率解除吸收柱。在45℃下和真空中將洗脫出的混合物濃縮至得到半固體物質。

    將干燥的物質再溶于150ml去離子水并且過濾出不溶物。在50℃下和真空中將該溶液濃縮至得到20%固含量并且在直流間接熱空氣噴霧干燥器中和下列條件下干燥。

    入口溫度:160℃

    出口溫度:80℃

    噴霧器RPM:12000

    產量為9gms。(HPLC顯示25%葫蘆巴堿?&?35%氨基酸)

    將上述物質再溶于250ml乙醇,通過41Whatmann濾紙過濾并且冷卻至0℃。在該溫度下,使干燥的氯化氫氣流通過它以便沉淀所述的葫蘆巴堿鹽酸鹽。將該沉淀過濾在濾紙上并且用冷乙醇洗滌且在60℃下真空干燥。

    實施例2:

    在滾筒式刨片機中將具有含水量低于5%的1000克葫蘆巴子剝離至2mm厚度。使剝離的物質上具有300mm床高的柱。在35℃下使5升己烷通過葫蘆巴子層并且使從底部收集的洗脫液再循環通過葫蘆巴子層10小時期限。10小時后,從葫蘆巴子層排空己烷。在35℃下使由異丙醇和水按照4∶1比例組成的溶劑混合物(8升)經再循環洗脫液通過該層8小時期限。8小時后,從葫蘆巴床排空提取物并且在50℃下和真空中濃縮所有收集的提取物而得到半固體物質。

    將濃縮的物質再溶于5升去離子水而得到澄清溶液。使該澄清溶液通過含400ml強酸陽離子交換凝膠型樹脂的柱2小時。使用由正-丁醇∶乙酸∶水按照12∶8∶4比例組成的系統作為流動相在硅膠預涂布板F254(1.05554.007)上檢查柱洗脫液上進行TLC篩選,不存在葫蘆巴堿,并且在UV?254nm下觀察。在飽和柱后,使用4升去離子水洗滌掉樹脂床的顏色和粘附的雜質。使用800ml?5N濃度的氨水以400m?l/小時的速率解除吸收柱。在45℃下和真空中將洗脫出的混合物濃縮至得到半固體物質。

    將干燥的物質再溶于150ml去離子水并且過濾出不溶物。在50℃下和真空至將該溶液濃縮至得到20%固含量并且在直流間接熱空氣噴霧干燥器中和下列條件下干燥。

    入口溫度:160℃

    出口溫度:80℃

    噴霧器RPM:12000

    產量為9gms。(HPLC顯示35%葫蘆巴堿?&?20%4-羥基異亮氨酸)

    實施例3:

    在滾筒式刨片機中將具有含水量低于5%的1000克葫蘆巴子剝離至2mm厚度。使剝離的物質上具有300mm床高的柱。在35℃下使5升己烷通過葫蘆巴子層并且使從底部收集的洗脫液再循環通過葫蘆巴子層10小時期限。10小時后,從葫蘆巴子層排空己烷。在35℃下使由異丙醇和水按照3.5∶1比例組成的溶劑混合物(8升)經再循環洗脫液通過該層8小時期限。8小時后,從葫蘆巴床排空提取物并且在50℃下和真空中濃縮所有收集的提取物而得到半固體物質。

    將濃縮的物質再溶于5升去離子水而得到澄清溶液。使該澄清溶液通過含400ml強酸陽離子交換凝膠型樹脂的柱2小時。使用由正-丁醇∶乙酸∶水按照12∶8∶4比例組成的系統作為流動相在硅膠預涂布板F254(1.05554.007)上檢查柱洗脫液上進行TLC篩選,不存在葫蘆巴堿,并且在UV?254nm下觀察。在飽和柱后,使用4升去離子水洗滌掉樹脂床的顏色和粘附的雜質。使用800ml?5N濃度的氨水以400ml/小時的速率解除吸收柱。在45℃下和真空中將洗脫出的混合物濃縮至得到半固體物質。

    將干燥的物質再溶于150ml去離子水并且過濾出不溶物。在50℃下和真空至將該溶液濃縮至得到20%固含量并且在直流間接熱空氣噴霧干燥器中和下列條件下干燥。

    入口溫度:160℃

    出口溫度:80℃

    噴霧器RPM:12000

    產量為10gms。(HPLC顯示35%葫蘆巴堿?&?18%4-羥基異亮氨酸氨基酸)

    將上述物質再溶于250ml乙醇,通過41Whatmann濾紙過濾并且冷卻至0℃。使干燥的氯化氫氣流通過它以便沉淀所述的葫蘆巴堿鹽酸鹽。將該沉淀過濾在濾紙上并且用冷乙醇洗滌且在60℃下真空干燥。

    實施例4:

    在滾筒式刨片機中將具有含水量低于5%的1000克綠小果咖啡剝離至2mm厚度。使剝離的物質上具有500mm床高的柱。在35℃下通過再循環洗脫液使包含9∶1比例的水和乙醇的溶劑混合物(8升)通過該層8小時期限。8小時后,從小果咖啡床中排空提取物并且在50℃下和真空中濃縮所有收集的提取物而得到半固體物質。

    將濃縮的物質再溶于5升去離子水而得到澄清溶液。使該澄清溶液通過含400ml強酸陽離子交換凝膠型樹脂的柱2小時。使用由正-丁醇∶乙酸∶水按照12∶8∶4比例組成的系統作為流動相在硅膠預涂布板F254(1.05554.007)上檢查柱洗脫液上進行TLC篩選,不存在葫蘆巴堿,并且在UV?254nm下觀察。在飽和柱后,使用4升去離子水洗滌掉樹脂床的顏色和粘附的雜質。使用800ml?5N濃度的氨水以400ml/小時的速率解除吸收柱。在45℃下和真空中將洗脫出的混合物濃縮至得到半固體物質。

    將干燥的物質再溶于150ml去離子水并且過濾出不溶物。在50℃下和真空至將該溶液濃縮至得到20%固含量并且在直流間接熱空氣噴霧干燥器中和下列條件下干燥。

    入口溫度:160℃

    出口溫度:80℃

    噴霧器RPM:12000

    產量為5克。(HPLC顯示60%葫蘆巴堿?&?剩余的氨基酸)

    將上述物質再溶于200ml乙醇,通過41Whatmann濾紙過濾并且冷卻至0℃。使干燥的氯化氫氣流通過它以便沉淀所述的葫蘆巴堿鹽酸鹽。將該沉淀過濾在濾紙上并且用冷乙醇洗滌且在60℃下真空干燥。

    實施例5:

    在Commuting碾磨機中將不含羊皮紙狀殼的1000克綠小果咖啡粉碎成100%通過20目篩。用6升去離子水在95-100℃將破碎的籽煮沸4小時并且通過濾布過濾出所有不溶物而達到澄清。將該澄清溶液冷卻至室溫并且在3小時期限內通過包含500ml新鮮再生的強酸陽離子交換樹脂的離子交換樹脂柱。使用由N-丁醇∶乙酸∶水按照10∶8∶5比例組成的TLC系統監測底部洗脫液不存在葫蘆巴堿并且通過UV在254nm處顯影。

    使用5升軟化水洗滌掉柱柱的所有顏色和雜質。用600ml?6%氨溶液洗脫柱并且使用上述提及的TLC系統檢查洗脫完全。在50℃下和真空柱將洗脫的液體濃縮至得到糊狀物。在75℃下將該糊狀物與100ml?20%在異丙醇中的鹽酸氣體一起研磨3小時并且冷卻至室溫。過濾所得沉淀并且使用500ml異丙醇洗滌掉顏色。在80℃下和真空中干燥固體而得到10克可自由流動的粉末。

    使用包含葫蘆巴堿和4HI以及葫蘆巴堿衍生物(鹽酸鹽)和4HI衍生物(鹽酸鹽)的新組合物實施下列實施例。

    實施例6:氟哌啶醇誘導的小鼠僵住癥

    氟哌啶醇為阻斷腦中多巴胺D2受體的精神抑制劑。它引起可以通過“小鼠僵住鋼棒測溫法”測定的錐體外系副作用。將小鼠僵住癥定義為在延長時間期限內校正外部施加的非正常姿態失敗。這種小鼠的僵住癥與在具有帕金森病的受試者中觀察到的運動不能、肌僵直和顫動相差無幾。如果將多巴胺能藥物提供給腦紋狀體多巴胺,那么可以逆轉氟哌啶醇誘發的僵住,因為它增加競爭性拮抗作用。

    操作:使用稱重為23-28g的兩性別的Swiss?Albino小鼠。用氟哌啶醇誘導僵住(0.5mg/kg?i.p.)并且通過鋼棒測溫法評價至多3小時。通過腹膜內對6只動物給予鹽水、測試藥物和標準品。將動物放入具有距盒底部2.5cm水平固定的木制傳力桿的半透明塑料盒中。使動物適應該盒2min。然后在雙肩周圍和前爪下輕握每只動物并且謹慎放在傳力桿上。測定棒上使用至少一只前爪花費的時間量。當動物移動其爪時,記錄時間并且使小鼠重新位于棒上。在30,60,120和360min對每只動物進行三次試驗,其中每組中6只動物。

    測試藥物已經在減輕僵住方面顯示出顯著的劑量依賴性響應(圖1)。發現10mg/kg劑量的標準藥物L-多巴的作用比100mg/kg劑量的測試藥物更有效。盡管這種差異顯著,但是證實測試藥物可快速起效并且避免了存在于標準藥物中的“起效-停止”作用。此外,標準藥物在對僵住的起始作用后表現出僵住減輕的下降。這證實了測試藥物的多巴胺能作用(圖1)。因此,可以觀察到測試藥物逆轉氟哌啶醇誘發的帕金森癥狀。

    逆轉氟哌啶醇誘發的僵住證實測試藥物組合物將為多巴胺受體拮抗劑的氟哌啶醇導致的副作用減小到最低限度的能力。因此,這表明該藥物為可以用于將多巴胺受體拮抗劑,包括抗精神病藥物的作用減少到最低限度的多巴胺能藥。

    實施例7:氧代震顫素拮抗作用

    氧代震顫素為膽堿能藥,其為毒蕈堿激動劑并且誘導帕金森綜合病樣體征,諸如顫動、共濟失調、痙攣狀態、唾液分泌、流淚和低體溫。氧代震顫素為膽堿能藥,它誘導小鼠過度顫動。如果藥物具有抗膽堿能特性,如阿托品,那么可以減輕顫動。

    操作:使用稱重為18-22g的6-10只雄性NMRI小鼠的組。通過口服對它們給予測試化合物或標準品(5mg/kg甲磺酸苯扎托品(benezatropine?mesilate))1小時,此后給予0.5mg/kg氧代震顫素。以5min時間期限對氧代震顫素給藥后給顫動評分1小時。

    在給予0.5mg/kg氧代震顫素后,顫動在15mins內開始并且持續30mins。

    參數:

    每組中使用的動物數量n=6

    顫動評分

    ??類別??顫動評分??5分鐘??顫動評分??15分鐘??顫動評分??30分鐘??顫動評分??45分鐘??僅對照組氧代震顫素n=6??3.0??2.8??2.7??2.6??測試化合物組30mg/kg和氧??代震顫素n=6??2.7??2.6??2.5??2.5??測試化合物組100mg/kg和??氧代震顫素n=6??1.6??1.6??1.8??1.9??測試化合物組200mg/kg和??氧代震顫素n=6??1.6??1.6??1.7??1.6??陽性對照阿托品5mg/kg和??氧代震顫素n=6??0.9??0.9??1.0??1.3

    測試化合物已經通過在100mg/kg和200mg/kg劑量下減小顫動評分表現出顯著活性。這種活性為一致性的并且持續至多45分鐘。在30mg/kg下的活性低。陽性對照阿托品具有測試活性,但隨時間下降。因此,測試藥物因適度抗膽堿能活性而逆轉帕金森癥狀。

    唾液分泌和流淚評分

    ??類別??30分鐘時的唾液??分泌??30分鐘時的流淚??評分??僅對照組氧代震顫素n=6??3.0??2.9??在30mg/kg下的測試化合物??2.5??2.6??在100mg/kg下的測試化合物??1.6??1.7??阿托品??0.8??0.6

    測試化合物已經表現出減小唾液分泌評分。然而,并非如阿托品一樣強有力,由此表明了適度的抗膽堿能作用。還減少了流淚。然而,并非如阿托品一樣強有力。

    1mg/kg阿托品和100、200和400mg/Kg測試藥物導致顫動顯著減輕(圖2)并且在30mg/kg劑量下不顯著。該藥物在30min時表現出最大作用,并且在45min后開始逆轉。因此,測試藥物在極高劑量下具有抗膽堿能特性。

    實施例8:6-羥基多巴胺模型

    6-羥基多巴胺(6-OHDA)為導致多巴胺能黑質紋狀體途徑一側損傷的神經毒素,所述的多巴胺能黑質紋狀體途徑誘導受損側紋狀體中突觸后多巴胺能受體超敏反應。對損害側(同側)循環給予間接起效的化合物,如苯丙胺,與之相反,此時給予直接起效的多巴胺能藥,然后對側循環給藥。因此,本試驗用于研究中樞多巴胺功能并且評價多巴胺拮抗劑和激動劑,特別是新的抗帕金森癥藥的活性。本試驗將主要具有多巴胺受體激動劑活性的藥物與主要具有多巴胺釋放藥物活性的那些明顯區別開來。

    操作:使用手術時稱重為200-250克的雄性Wistar小鼠。使它們寄居在可自由取食和飲水的受控環境中。使用戊巴比妥鈉麻醉動物。將頭放入立體定位裝置(DKI?900)并且按照Konig和Klippel的圖譜放置。在頭蓋骨皮膚上做矢狀切開后,使用電環鉆機鉆2mm寬孔。謹慎不損害腦膜。與漢密爾頓氏注射器連接30標準規格不銹鋼插管的目標針對黑質前帶致密層(距儀器零點坐標前1.88mm,側向2.0mm和背腹側-8.2mm)。以1γ/L/min的速率注射總計在4γ/L鹽水中的8μg6-HAD。在顱內注射后,閉合傷口。

    使動物恢復幾周并且進行損害研究。與固態編制程序儀器連接的特別構成的不透明塑料球用作測試室。整個數量相對于損害同側或對側旋轉,每隔15min記錄在自動輸出情報指示紙帶計數器上,持續1或2小時測試期。為了測定同側旋轉的對照值,對每位受試者給予2.5mg/kg?d-苯丙胺并且即刻放入旋轉室2小時。通過注射1mg/kg?s.c.阿撲嗎啡并且記錄大鼠旋轉1小時測定對側轉圈的對照值。i.p或sc.給予測試化合物并且將動物放入轉圈室。在1小時期限內記錄旋轉次數。本實驗在30只動物中進行并且將平均值列在下表中。

    ??藥物和劑量??對側旋轉??同側旋轉??無菌水??1??0.33??測試藥物(10mg/kg)??0.67??5.33??測試藥物(30mg/kg)??0.83??30.67??測試藥物(100mg/kg)??0.35??10.4??阿撲嗎啡(0.3mg/kg)??169.33??0.67??L-多巴(10mg/kg)??45.67??0.83

    測試藥物在30mg/kg劑量(P<0.001)和10mg/kg劑量(P<0.05)下誘導顯著的同側旋轉。本試驗模擬多巴胺耗盡和隨后的帕金森病。抗帕金森病化合物可以具有對側或同側旋轉。藥物,如苯丙胺誘導同側旋轉。而藥物,如L-多巴,阿撲嗎啡,溴隱亭誘導對側旋轉。單胺氧化酶B抑制劑,如Selgiline誘導同側旋轉。COMT抑制劑誘導對側旋轉。

    測試藥物特性類似于苯丙胺或單胺氧化酶(MAO-B)抑制劑。因此,測試藥物可以具有多巴胺釋放特性,該特性與在這些劑量下的對照組相比具有顯著性。

    這種模型為測定化合物是否為多巴胺能化合物或對多巴胺受體起作用的化合物的一種重要模型。使用測試化合物的同側旋轉證實了其多巴胺能活性。不同于目前類型的表現出對側旋轉的藥物,測試化合物為多巴胺能藥,而非受體激動劑。

    本實驗證實了測試藥物的獨特多巴胺能活性。因此,這種多巴胺能組合物可以具有涉及提高多巴胺水平的應用。提高多巴胺水平對催乳素水平具有抑制作用。提高的催乳素水平為PCOS和不育的原因之一。這種多巴胺能化合物通過提高多巴胺水平抑制催乳素水平。

    這種多巴胺能化合物也作為肌肉松弛藥應用。

    實施例9:測試藥物對MPTP治療小鼠的作用的測試

    本試驗測定MPTP(甲基苯基四吡啶)治療的小鼠在它們被使用測試藥物預治療和治療后運動行為的作用程度。

    當通過全身途徑給予MPTP時,它導致多巴胺系統功能的暫時性受損。本試驗有助于確定神經變性過程的病理生理學和神經營養藥和神經保護藥的作用。

    MPTP顯著減少了小鼠運動行為。測試藥物的功效基于MPTP治療的小鼠中運動活動的增加百分比。

    根據如下情況測定運動行為:

    1.自發性運動

    ??治療??平均值±SEM??%增加??未治療??868.166±17.377??-??MPTP??290.166±18.679###??-??測試藥物(前):預防??564.166±24.106***??94.43%??測試藥物(后):治療??280.500±23.891ns??-3.33%

    使用測試藥物預-治療小鼠顯著減少了MPTP的作用。盡管預-治療產生了聯合效果,但是使用測試藥物治療小鼠,使用MPTP處理后未表現出運動活動增加。

    2.開放區域中交叉的正方形數量

    ??治療??平均值±SEM??%增加??未治療??465.500±18.005??-??MPTP??122.333±8.151###??-??測試藥物(前):預防??250.166±12.908***??104.49%??測試藥物(后):治療??143.166±12.475ns??17.03%

    使用測試藥物預-治療小鼠顯著增加了小鼠交叉的正方形數量,而使用測試藥物治療后未表現出極為顯著的增加。

    3.開放區域中行進的總距離

    ??治療??平均值±SEM??%增加??未治療??698.250±27.008??-??MPTP??183.500±12.227###??-??測試藥物(前):預防??375.250±19.363***??104.49%??測試藥物(后):治療??214.750±18.713ns??17.03%

    使用測試藥物預-治療小鼠顯著增加了小鼠行進的距離,而使用測試藥物治療后未表現出極為顯著的增加。

    4.開放區域中的總運動時間

    ??治療??平均值±SEM??%增加??未治療??233.420±7.322??-??MPTP??217.330±8.979??-??測試藥物(前):預防??235.350±9.001??8.29%??測試藥物(后):治療??242.790±13.503??11.71%

    使用測試藥物治療前/后過程中對MPTP治療小鼠未觀察到明顯的時間改變。

    5.開放區域中的平均速率

    ??治療??平均值±SEM??%增加??未治療??2.999±0.124??-??MPTP??0.846±0.051??-??測試藥物(前):預防??1.595±0.059***??88.53%??測試藥物(后):治療??0.890±0.079ns??5.2%

    使用測試藥物預-治療小鼠顯著增加了小鼠的平均速率,而治療后未表現出速率增加。

    因此,通過上述實驗觀察到通過上述方法制備的組合物具有有效的多巴胺能活性并且為MAO抑制劑。這種最佳藥物劑量未表現出在該藥物極高劑量下觀察到的抗膽堿能活性。

    實施例10:測試藥物對酪胺增強作用的作用

    非選擇性MAO抑制劑在用作神經精神藥物時導致稱作酪胺增強作用的情況。酪胺為一種氨基酸,是單胺去甲腎上腺素的前體。單胺氧化酶-A(MAO-A)為防止酪胺轉化成去甲腎上腺素的酶。因此,在如MAO-A抑制劑起作用的藥物存在下,去甲腎上腺素水平高。大部分發酵食品,如干酪,葡萄酒等具有高百分比的酪胺。因此,當如這些食品被消耗MAO-A抑制劑的受試者攝入時,酪胺水平突然激增且隨后去甲腎上腺素水平也升高。這種去甲腎上腺素水平的突然增加顯著升高了血壓并且可以導致致命后果。

    進行酪胺增強作用試驗是為了測定測試藥物對MAO-A/B的選擇性。為了精確測定本試驗,在急性和慢性藥物環境中進行本研究。

    急性研究:

    在急性研究中,取雄性Wistar大鼠(n=5),通過注射烏拉坦溶液(1.25g/kg,i.p.)麻醉。將體溫維持在37℃下并且給氣管插套管以維持氣道。(血壓)儀器插入連接左側頸動脈和頸靜脈的套管,以便分別監測血壓(BP)和給藥。將動脈導管連接血壓傳感器以便使用通道生理記錄儀系統測量血壓。記錄測試藥物(30mg/kg?p.o.)對酪胺(5mg/kg?i.v.)的作用(圖3)。

    進行的研究有3組:

    1組:正常

    2組:酪胺+測試藥物

    3組:單獨的酪胺

    慢性研究:

    對雄性Wistar大鼠(n=5)給予測試藥物(30mg/kg?p.o.)1個月。將體溫維持在37℃下并且給氣管插套管以維持氣道。儀器插入連接左側頸動脈和頸靜脈的套管,以便分別監測血壓(BP)和給藥。將動脈導管連接血壓傳感器以便使用通道生理記錄儀系統測量血壓。記錄測試藥物(30mg/kg?p.o.)對酪胺(5mg/kg?i.v.)的作用(圖4)。

    進行的研究有3組:

    1組:正常

    2組:酪胺+測試藥物

    3組:單獨的酪胺

    在急性和慢性研究中,測試藥物未表現出任何血壓升高,由此確立它們不是MAO-A抑制劑。酪胺導致血壓適當升高,目前類型的MAOIs通常導致血壓顯著性升高(酪胺增強作用)。因此,從急性和慢性研究中觀察到的示意圖中可以看出,測試藥物不會強化血壓升高。

    因此,認為測試藥物為MAO-B抑制劑,它不會導致酪胺增強作用并且不會與從膳食中的食物中攝取的酪胺發生相互作用。這就是測試藥物超過現存類型藥物的主要優點。

    實施例11:測試藥物酶測定中的評價

    用于本實驗的抑制曲線如圖5中所示。如每篇參考文獻中所述進行這些酶測定。

    ·Youdim?MB和Finberg?JP(1991)

    New?directions?in?monoamine?oxidase?A?and?B?selectiveinhibitors?and?substrates.Biochem?Pharmacol.41(2):155-162

    ·Urban?P,Andersen?JK,Hsu?HP和Pompon?D(1991)

    Comparative?membrane?locations?and?activities?of?humanmonoamine?oxidases?expressed?in?yeast.FEBS?Lett.286(1-2):142-146。

    本實驗確定了測試藥物組合物F-1在抑制酶單胺氧化酶中的能力。MAOs為催化單胺類氧化的酶。在人體中存在兩種類型的MAOs-MAOA和MAO?B。在神經元和星形神經膠質以及CNS外發現了這兩種酶。

    在CNS外發現了MAOs:

    MAO-A:肝、胃腸道和胎盤

    MAO-B:血小板

    兩種MAOs對單胺能神經遞質失活而言也為關鍵的,就此而言,它們展示出不同的特異性。

    .MAO-A:5-羥色胺,去甲腎上腺素(norepinephrine)(去甲腎上腺素(noradrenaline))和腎上腺素(epinephrine)(腎上腺素(adrenaline))分解。

    .MAO-B:苯乙胺分解

    兩種MAOs形式分解多巴胺。

    目前類型的MAO抑制劑通常具有與具有高酪胺水平的食物,如干酪,腌制食品,巧克力,啤酒,葡萄酒和某些肉類的相互作用。酪胺與MAOIs的相互作用可以導致血壓危險性地高度增加,這可以導致中風。

    例證測試化合物選擇性抑制MAO-B的響應曲線如圖5中所示。該示意圖例證了在治療與多巴胺相關的疾病,包括帕金森病中極為有用的測試藥物對MAO-B的抑制。

    實施例10中進行的酪胺增強作用實驗表明測試藥物對血壓不具有升高作用且由此對有此需要的受試者而言可安全地使用。

    實施例12:

    就人體劑量而言

    1)就控制帕金森病的治療應用而言,人體劑量為0.5mg/kg-20mg/kg/日作為單劑量或每天分成三次等同劑量。

    2)就在降低涉及性欲缺乏和性功能障礙的催乳素水平的治療劑量而言,每日推薦劑量為0.5mg/kg體重-25mg/kg體重作為單劑量或分成3次等同的分次劑量。

    3)用于終止哺乳母親泌乳的治療劑量為0.5mg/kg-20mg/kg體重/日。

    4)就運動生理學中的肌松弛而言,推薦劑量為0.25mg/kg-17mg/kg體重。

    5)就精神警覺度和行為增強而言,推薦的每日劑量為0.25mg/kg-15mg/kg體重。

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本文標題:包含葫蘆巴堿和4羥基異亮氨酸的藥物組合物及其方法.pdf
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